奧林巴斯顯微鏡在現(xiàn)代社會(huì)中的應(yīng)用非常廣泛，我們需要提高設(shè)備的使用效率，把設(shè)備的大功能發(fā)揮出來。操作人員需要掌握奧林巴斯顯微鏡的使用法則，提高顯微鏡的使用效率。而在使用的過程中，樣品需要脫水，所脫掉的水份平均約占組織重量的三分之二，從取材到鏡下觀察，樣品還要經(jīng)過一系列的化學(xué)與物理因素的處理。因而建立了冷凍技術(shù)。那么奧林巴斯顯微鏡的冷凍技術(shù)到底如何，請(qǐng)隨上海維翰一起走進(jìn)奧林巴斯顯微鏡冷凍技術(shù)的世界。

　　奧林巴斯顯微鏡的冷凍技術(shù)不僅能解決某些常規(guī)方法不可避免的問題，揭示常規(guī)方法無法看到的一些結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)，而且所得結(jié)果也可與常規(guī)方法的結(jié)果進(jìn)行比較，顯微鏡檢驗(yàn)后者的客觀真實(shí)性。
　　其中冷凍技術(shù)所面臨的一個(gè)共同間題是避免產(chǎn)生冰晶，特別是大的冰晶。這些冰晶一且產(chǎn)生，將會(huì)使細(xì)胞結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞。因此，要設(shè)法在冷凍過程中只產(chǎn)生很小的冰晶，奧林巴斯顯微鏡如果可能，好不產(chǎn)生冰晶，即使組織中的水份處在“玻璃態(tài)”。
　　奧林巴斯顯微鏡為達(dá)到冷凍這一目的，目前采取的措施有兩個(gè)：
　　(1)速凍。尼康顯微鏡單純使用速凍時(shí)，為了不產(chǎn)生冰晶，奧林巴斯顯微鏡組織的冷凍速度應(yīng)達(dá)到一1000C/ (s·cm)或更快；
　　(2)使用冷凍保護(hù)劑，使用保護(hù)劑后，徠卡顯微鏡組織的冷凍速度可降至10- 1000C/(s·cm)，而不致產(chǎn)生大的冰晶。
　　樣品經(jīng)冷凍后，在真空中斷裂，并制備裂面的復(fù)型，用于電鏡觀察的方法稱為冷凍斷裂。如果在制備復(fù)型前，奧林巴斯顯微鏡先加溫樣品，使裂面上的冰部份升華，則稱為冷凍蝕刻。這兩種方法的共同特點(diǎn)是可以在復(fù)型膜上奧林巴斯顯微鏡觀察裂面的立體形象，此外，冷凍蝕刻還可以揭示細(xì)胞膜內(nèi)外表面的二維結(jié)構(gòu)。
　　固體升華為氣體的方法，因無界面形成，奧林巴斯顯微鏡樣便不會(huì)受表面張力損傷。
　　冷凍干燥的操作原則是取材后立即將樣品放入液氮中，奧林巴斯顯微鏡然后將冷凍的樣品移入真空裝置(如真空噴涂?jī)x)中，在低真空(10-Zt)中抽干。但當(dāng)樣品直接放入液氮中時(shí)，奧林巴斯顯微鏡樣品周圍往往有許多小泡(由于樣品溫度大大高于液氮，液氮在樣品周圍沸騰造成)，阻礙樣品內(nèi)部進(jìn)一步冷卻。
　　克服的辦法是先把樣品放入液態(tài)丙烯(一800C)、或液態(tài)乙烷(一800c)、甲烷(一480C)中冷凍后，奧林巴斯顯微鏡再轉(zhuǎn)移至液氮中。80年代日人用有機(jī)溶劑干燥法，如用氟里昂TF或酒精冷凍干燥法等，奧林巴斯顯微鏡效果也很好。
　　以酒精冷凍干燥法為例，奧林巴斯顯微鏡簡(jiǎn)述操作程序：樣品按普通掃描電鏡標(biāo)本制備方法進(jìn)行固定和乙醇系列脫水，然后將其由100%乙醉移至100%乙醚中，再將樣品投入裝滿液氮的高約5cm的金屬杯中使之冷凍。把裝有冷凍樣品的金屬杯放入真空裝置中，用旋轉(zhuǎn)泵抽氣。
　　奧林巴斯顯微鏡由于在封閉空間體積不變的情況下，壓力降低會(huì)引起溫度下降，液氮變?yōu)楣虘B(tài)氮并且升華。然后樣品中的乙醉也升華，樣品干燥。待金屬杯溫度回到室溫后取出樣品，乙睛急速蒸發(fā)時(shí)，就要冷卻固化。利用這種性質(zhì)很容易將樣品干燥。乙睛另一性質(zhì)是它可溶于水也可溶于乙醇.因此可以用乙腑干燥標(biāo)品，其步驟如下：
　　樣品按一般方法固定，用濃度遞增的乙腑系列(50寫-100%)脫水(每次脫水時(shí)間需20min )。用容徽約lml的鋁制容器裝滿乙脯，把已脫水的樣品放入。將該容器放入真空裝置中。抽真空，奧林巴斯顯微鏡容器驟冷，乙睛成為固態(tài)。繼續(xù)抽真空時(shí)乙睛升華、樣品干燥。